A fluorofor-címkézés befolyásolja a koleszterinnel módosított siRNS-ek sejtfelhalmozódási és géncsendesítési aktivitását In vitro Nukleinsav-biokémiai laboratórium, Intézet" /> A fluorofor-címkézés befolyásolja a koleszterinnel módosított siRNS-ek sejtfelhalmozódási és géncsendesítési aktivitását In vitro Nukleinsav-biokémiai laboratórium, Intézet" />

In Vitro"> A fluorofor címkézés hatással van a koleszterinnel módosított siRNS-ek sejtfelhalmozódási és géncsendesítési aktivitására In Vitro

Nukleinsav-biokémiai laboratórium, Kémiai Biológiai és Alapvető Orvostudományi Intézet SB RAS, Novoszibirszk, Oroszország.

Nukleinsav-biokémiai laboratórium, Kémiai Biológiai és Alapvető Orvostudományi Intézet SB RAS, Novoszibirszk, Oroszország.

RNS-kémiai laboratórium, Kémiai Biológiai és Alapvető Orvostudományi Intézet SB RAS, Novoszibirszk, Oroszország.

Nukleinsav-biokémiai laboratórium, Kémiai Biológiai és Alapvető Orvostudományi Intézet SB RAS, Novoszibirszk, Oroszország.

RNS-kémiai laboratórium, Kémiai Biológiai és Alapvető Orvostudományi Intézet SB RAS, Novoszibirszk, Oroszország.

Nukleinsav-biokémiai laboratórium, Kémiai Biológiai és Alapvető Orvostudományi Intézet SB RAS, Novoszibirszk, Oroszország.

Nukleinsav-biokémiai laboratórium, Kémiai Biológiai és Alapvető Orvostudományi Intézet SB RAS, Novoszibirszk, Oroszország.

Cím levelezés: Elena L. Csernolovszkaja, DSc, Kémiai Biológiai és Alapvető Orvostudományi Intézet, Nukleinsav-biokémiai Laboratórium, SB RAS, Lavrentiev Avenue, 8, Novoszibirszk, 630090, Oroszország

Nukleinsav-biokémiai laboratórium, Kémiai Biológiai és Alapvető Orvostudományi Intézet SB RAS, Novoszibirszk, Oroszország.

Absztrakt

A vizsgálat célja a fluoroforok hatásának elemzése volt a kis interferáló RNS (siRNS) és koleszterin-konjugátumainak intracelluláris felhalmozódására és biológiai aktivitására. Ebben a tanulmányban a szár-hurok valós idejű PCR és kalibrációs görbéket használtuk a kvantitatív sejtes siRNS felhalmozódáshoz. A fluorofórok kötődése mind az siRNS konjugátumok felhalmozódását, mind biológiai aktivitását jelentősen befolyásolta. Ennek a hatásnak a súlyossága jelentősen függött a konjugátum szerkezetétől; az siRNS-hez kapcsolt fluoroforok (Cy5.5 vagy Alexa-488), amelyek a duplex koleszterinnel ellentétes oldalával néznek szembe, fokozták a konjugátum nem produktív intracelluláris felhalmozódását, ha hordozó nélküli üzemmódban szállították őket. Az siRNS konjugátumok fokozott sejtszaporodása nem eredményezte a konjugátum fokozott biológiai aktivitását. Ezenkívül egy hidrofób fluorofor, például a Cy5.5 kapcsolódása a hagyományos siRNS-hez a látszólagos intracelluláris felhalmozódást is növelte, de nem a biológiai aktivitását. Fluoreszcens címkék felhasználása tehát az siRNS és különböző molekulákkal képzett konjugátumok intracelluláris felhalmozódásának vizsgálatához csak korlátozott számú struktúrára lehetséges, és alternatív módszerekkel történő igazolást igényel.

  • Ábrák
  • Hivatkozások
  • Összefüggő
  • Részletek